Отримання трансгенних рослин Arachis hypogaea з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 / Ніфантова С.М. та ін. 2015
Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6
Ніфантова С.М., Комарницький І.К., Симоненко Ю.В., Кучук М.В.
Рис. 1. Схематичне зображення плазміди pCB064 |
Були отримані трансгенні рослини арахісу (Arachis hypogaea L.), які містять гени ag85, ESaT6, що кодують білки-стимулятори імунної відповіді проти туберкульозу та маркерний ген nptII. Генетичну трансформацію проводили за допомогою штаму GV3101 Agrobacterium tumefaciens, з використанням плазміди pCB064. Інтеграція перенесених генів у рослинний геном доведена за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР-аналізу). Продукування білка з протитуберкульозною активністю виявили вестерн-блот гібридизацією.
У ході проведеної роботи була визначена селективна концентрація канаміцину для калюсних тканин введених у культуру in vitro рослин арахісу, яка склала 100 мг/л.
Було відібрано 23 регенераційні лінії, які в подальшому аналізували на наявність перенесених генів за допомогою ПЛР-аналізу, з яких 8 ліній виявилися трансгенними і містили гени ag85, ESaT6 та nptII. Результати ампліфікації фрагментів ДНК потрібного розміру 484 пн для гена ag85, та 103 пн для ESaT6 представлені на малюнках (рис. 3, 4) відповідно.
Продукування протеїну ESaT6-ag85 (dTMD)-6His у біомасі трансгенної рослини арахісу лінії r15 виявлене методом Вестерн-блот гібридизації.
Висновок
У результаті проведеної нами роботи вперше були отримані трансгенні рослини арахісу з генами ag85, ESaT6, що кодують білки-стимулятори імунної відповіді проти туберкульозу, доведена їх трансгенна природа та виявлене продукування рекомбінантного білка.
Джерела
- Ніфантова С.М., Комарницький І.К., Симоненко Ю.В., Кучук М.В. Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 // Фактори експериментальної еволюції органiзмiв: Зб. наук. пр. / Національна академія наук України, Інститут молекулярної біології і генетикп, Укр. Т-во генетиків і селекціонерів iм. М.I. Вавилова; редкол. / В. А. Кунах (голов. ред.) [та iн.] – К.: Укр. т-во генетиків і селекціонерів ім. М.І. Вавилова, 2015. – Т. 17. – С. 217-220