Генетична трансформація салату Lactuca sativa - Історія редагувань

WikiSysop: /* Публікації по темі */

2015-10-01T07:04:27Z

‎Публікації по темі

WikiSysop: /* Публікації по темі */

2015-09-15T20:56:44Z

‎Публікації по темі

WikiSysop: /* Публікації по темі */

2015-09-15T20:55:18Z

‎Публікації по темі

WikiSysop: /* Публікації по темі */

2015-09-15T20:54:32Z

‎Публікації по темі

WikiSysop в 06:00, 15 жовтня 2010

2010-10-15T06:00:05Z

WikiSysop в 18:56, 11 жовтня 2009

2009-10-11T18:56:51Z

WikiSysop в 18:55, 11 жовтня 2009

2009-10-11T18:55:08Z

WikiSysop в 09:34, 11 жовтня 2009

2009-10-11T09:34:38Z

WikiSysop в 09:34, 11 жовтня 2009

2009-10-11T09:34:08Z

WikiSysop в 09:23, 11 жовтня 2009

2009-10-11T09:23:02Z

@@ Рядок 27: / Рядок 27: @@
-[[Category:Біотехнології / Відділ генетичної інженерії]]
-[[Category:Матвєєва Н.А.]]
 [[Category:салат]]
 [[Category:Lactuca sativa]]
 [[Category:Генетична інженерія]]

@@ Рядок 29: / Рядок 29: @@
 [[Category:Біотехнології / Відділ генетичної інженерії]]
 [[Category:Матвєєва Н.А.]]
 [[Category:Генетична інженерія]]

@@ Рядок 28: / Рядок 28: @@
 [[Category:Біотехнології / Відділ генетичної інженерії]]
-[[Category:Матвєєва Біотехнології]]
+[[Category:Матвєєва Н.А.]]
 [[Category:Генетична інженерія]]

@@ Рядок 29: / Рядок 29: @@
 [[Category:Біотехнології / Відділ генетичної інженерії]]
 [[Category:Матвєєва Біотехнології]]
-[[Category:Дослідження співробітників ІКБГІ]]

← Попередня версія		Версія за 06:00, 15 жовтня 2010
Рядок 29:		Рядок 29:
	[[Category:Біотехнології / Відділ генетичної інженерії]]		[[Category:Біотехнології / Відділ генетичної інженерії]]
	[[Category:Матвєєва Біотехнології]]		[[Category:Матвєєва Біотехнології]]
		+	[[Category:Дослідження співробітників ІКБГІ]]

@@ Рядок 1: / Рядок 1: @@
-Оскільки відомою є сортозалежність частоти регенерації рослин, нами було здійснено скрінінг 8 сортів салату. Показано, що на середовищі S1 з макро- та мікроелементами MS, 3 мг/л кінетину та 0,5 мг/л НОК спостерігалася висока частота регенерації пагонів для більшості сортів: для сорту Єралаш 95%, Гренада - 96%, Рубінове мереживо - 98%, Сніжинка - 80%, Ред корал - 82 %, Грін корал - 80%, Єва -20%, Майська королева - 5% (Матвеева и др., 2009). Було виявлено, що найвищий регенераційний потенціал мали проксимальні частини сім&rsquo;ядольних листків салату незалежно від сорту. При їх культивуванні на середовищі S1 пряма регенерація рослин починалася через 7-8 діб. Утворювалося 10-15 пагонів на експлант розміром 3х5мм, в той час як на дистальній та середній частинах листків в цей термін пагони не утворювалися.
+Оскільки відомою є сортозалежність частоти регенерації рослин, нами було здійснено скрінінг 8 сортів салату. Показано, що на середовищі S1 з макро- та мікроелементами MS, 3 мг/л кінетину та 0,5 мг/л НОК спостерігалася висока частота регенерації пагонів для більшості сортів: для сорту Єралаш 95%, Гренада - 96%, Рубінове мереживо - 98%, Сніжинка - 80%, Ред корал - 82 %, Грін корал - 80%, Єва -20%, Майська королева - 5% ([[Публікація:Матвеева НА та ін (2009) Агробактериальная трансформация салата (Lactuca sativa L) конструкциями, несущими гены бактериальных антигенов...|Матвеева и др., 2009]]). Було виявлено, що найвищий регенераційний потенціал мали проксимальні частини сім&rsquo;ядольних листків салату незалежно від сорту. При їх культивуванні на середовищі S1 пряма регенерація рослин починалася через 7-8 діб. Утворювалося 10-15 пагонів на експлант розміром 3х5мм, в той час як на дистальній та середній частинах листків в цей термін пагони не утворювалися.
 Для трансформації салату-латуку ''L. sativa'' сортів Єралаш, Рубінове мереживо та Сніжинка було використано конструкції рСВ063 та рСВ064 з генами ''esxA ''та ''esxA- fbpB&Delta;TMD'', що кодують туберкульозні антигени ESAT6 і ESAT6:Ag85В(-TMD). Після кокультивування з бактерією експланти переносили на середовище S-1 з 25 мг/л Km для селекції трансформованих клонів та 500 мг/л Cef для елімінації бактерій. Завдяки високій регенераційній здатності сорту Єралаш частота трансформації експлантів (відношення кількості експлантів із зеленими на селективному середовищі пагонами до загальної кількості експлантів) склала 62% при використанні конструкції pCB063 і 44% для конструкції pCB064. Для сортів Рубінове мереживо та Сніжинка (pCB064) ці показники становили відповідно 32 % і 18 %. Таким чином, частота трансформації експлантів різних сортів дещо відрізнялася. На нашу думку, це пов&rsquo;язано з сортовою відмінністю в регенерації рослин. В результаті селекції було отримано більше 100 зелених рослин трьох сортів (рис. 9, ''а''). Аналіз 11 рослин сорту Єралаш (pCB063 та pCB064), 6 рослин сорту Рубінове мереживо (pCB064), 4 рослин сорту Сніжинка (pCB064) виявив присутність як ''nptII'', так і цільових генів ''esxA'' та ''esxA- fbpB&Delta;TMD'' у всіх рослин крім одної (рис. 9, ''б'').
@@ Рядок 18: / Рядок 18: @@
 [[Image:Аналіз зворотних транскриптів (РНК-ЗТ, 2-5, 8-11) і геномної ДНК (ДНК, 6-7, 12-13) трансформованих рослин салату (рис 10 Матвєєва автореферат).jpg|900px]]
-Рис. 10. Аналіз зворотних транскриптів (РНК-ЗТ, 2-5, 8-11) і геномної ДНК (ДНК, 6-7, 12-13) трансформованих рослин салату: М &ndash; маркер; 1 &ndash; ДНК нетрансформованої рослини; 2-13 &ndash; трансформовані рослини: 6, 12 - ген ''nptII''; 7, 13 - ген ''esxA''; 3, 9 &ndash; зворотні транскрипти гена ''nptII'';
+Рис. 10. Аналіз зворотних транскриптів (РНК-ЗТ, 2-5, 8-11) і геномної ДНК (ДНК, 6-7, 12-13) трансформованих рослин салату: М &ndash; маркер; 1 &ndash; ДНК нетрансформованої рослини; 2-13 &ndash; трансформовані рослини: 6, 12 - ген ''nptII''; 7, 13 - ген ''esxA''; 3, 9 &ndash; зворотні транскрипти гена ''nptII''; 5, 11 - зворотні транскрипти гена ''esxA''; 2, 4, 8, 10 &ndash; відсутність синтезу зворотних транскриптів у відсутності ревертази
-−
 , 11 - зворотні транскрипти гена ''esxA''; 2, 4, 8, 10 &ndash; відсутність синтезу зворотних транскриптів у відсутності ревертази
 Таким чином, методом агробактеріальної трансформації з високою частотою створено генетично модифіковані рослини салату трьох сортів з генами бактеріальних антигенів ESAT6 та ESAT6:Ag85В(-ТМД). Показано, що в цих рослинах можлива як наявність, так і відсутність транскрипції цільового гена за стабільної транскрипції селективного гена. Трансгени успадковувалися та детектувалися у рослин наступних поколінь (Т<SUB>1</SUB> та Т<SUB>2</SUB>). Салат як об&rsquo;єкт з високим регенераційним потенціалом може бути використаний для створення генетично модифікованих рослин (їстівних вакцин).

← Попередня версія		Версія за 09:34, 11 жовтня 2009
Рядок 16:		Рядок 16:


−	[[Image:Аналіз зворотних транскриптів (РНК-ЗТ, 2-5, 8-11) і геномної ДНК (ДНК, 6-7, 12-13) трансформованих рослин салату (рис 10 Матвєєва автореферат).jpg]]	+	[[Image:Аналіз зворотних транскриптів (РНК-ЗТ, 2-5, 8-11) і геномної ДНК (ДНК, 6-7, 12-13) трансформованих рослин салату (рис 10 Матвєєва автореферат).jpg\|900px]]

	Рис. 10. Аналіз зворотних транскриптів (РНК-ЗТ, 2-5, 8-11) і геномної ДНК (ДНК, 6-7, 12-13) трансформованих рослин салату: М – маркер; 1 – ДНК нетрансформованої рослини; 2-13 – трансформовані рослини: 6, 12 - ген ''nptII''; 7, 13 - ген ''esxA''; 3, 9 – зворотні транскрипти гена ''nptII'';		Рис. 10. Аналіз зворотних транскриптів (РНК-ЗТ, 2-5, 8-11) і геномної ДНК (ДНК, 6-7, 12-13) трансформованих рослин салату: М – маркер; 1 – ДНК нетрансформованої рослини; 2-13 – трансформовані рослини: 6, 12 - ген ''nptII''; 7, 13 - ген ''esxA''; 3, 9 – зворотні транскрипти гена ''nptII'';

@@ Рядок 4: / Рядок 4: @@
 {|
-|[[Image:Селекція рослин салату на наявність гена nptII (рис 9а Матвєєва автореферат).jpg|450px]]
+|[[Image:Селекція рослин салату на наявність гена nptII (рис 9а Матвєєва автореферат).jpg|550x300px]]
-|[[Image:ПЛР-аналіз наявності гена синтезу білку ESAT6 (1-5) та nptII (6-10) в трансгенних рослинах салату (рис 9а Матвєєва автореферат).jpg|450px]]
+|[[Image:ПЛР-аналіз наявності гена синтезу білку ESAT6 (1-5) та nptII (6-10) в трансгенних рослинах салату (рис 9а Матвєєва автореферат).jpg|400x300px]]
 |}